2台LP05C恒流泵分别用于冲洗和洗脱。1台Gilson303恒流泵用于进样。4根半制备柱(1cm10cm,BTR).4个六位阀(Rheodyne7060,USA)分别用于各柱之间的连接,残余液与萃取液的收集与检测,以及干净溶剂的回收。另外3个分别用于洗脱、进样、冲洗。所有连接管路均采用不锈钢管。泵与进样阀、洗脱阀以及冲洗阀之间均连有过滤器(250108,AltechAssociates,Inc).
分析系统SPD6A岛津紫外检测器,SupelcosilLC18柱(46mm25cm).后处理一台ZPQ971型旋转薄膜蒸发器用于浓缩和烘干。色谱分析条件流动相:甲醇水=73,流速:10mL/min,检测波长:227nm,灵敏度:006AUFS.
样品的前处理采集新鲜的东北红豆杉树叶,用清水洗净放在阴凉干燥处干燥(148h左右)后,用植物粉碎机将树叶粉碎成小于2mm的粉末,称量其粉碎后的质量。取100mg的树叶粉末放入烧杯中,用500mL乙醇的水溶液(乙醇水=46)浸泡,在搅拌器的搅拌下进行萃取(12h),将萃取液用离心机处理,将上层的萃取液倒入烧杯中,先用滤纸抽滤,再用045m的滤膜抽滤,将所得的萃取滤液放于烧杯内,每100mL加入50g铵盐搅拌,放入超声波清洗机中使其分层后,倒入分液漏斗中静置。分层后弃去水层,将上层浓缩液再进行二次及三次浓缩。
将该溶液稀释后在HPLC分析柱上进20L进行分析,结果如所示。标准样品确定紫杉醇的保留时间为35min,紫杉醇峰前三个峰均为与紫杉醇结构相近的极性较弱保留时间较长的紫杉烷类化合物,另一部分是极性较强保留时间较少的杂质。
原提取液分析谱高分子树脂柱上紫杉烷浓度分布由可看出杂质含量很高。将此溶液浓缩后过滤,用045m的滤膜抽滤除去固体杂质。进样1mL在高分子树脂柱上进行洗脱,洗脱液为乙醇的水溶液(乙醇水=28),洗脱液流速为10mL/min,洗脱05h后,改用洗脱液为乙醇的水溶液(乙醇水=64),流速为10mL/min,2min收集一次馏分,取间隔的馏分。在分析柱上测定洗脱过程中紫杉醇与紫杉烷的浓度分布及二者的浓度比,结果如所示。
本文采用树叶作为原料,解决了原料资源的问题;利用乙醇作为溶剂,实现了清洁生产,降低成本的目的;利用高分子树脂柱及SMBC系统获得了高纯度的产品,为实现规模化生产提供了合理的工艺路线。